ein paar Fragen zu Berechungen |
| Charly19 | 2009-10-04 17:35:44 |
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Beitrag #1 • | Hallo,
ein paar Fragen zu Berechungen - großer Bahnhof :( :
1.) 10% Stocklösung. Sie wollen 45ml einer 1% Lsg. Wie gehen sie vor:
Stimmt das so: V1 x K1 = V2 x K2
-> V1 = 4,5ml
4,5ml der 10% Stocklsg. + 40,5ml H20
2.) Standleitung
"Sie haben DNA-Lsg. mit einer Konzentration von 200ng/mikroliter. Für die Positiv-Kontrolle bei der PCR benötigen sie eine Konzentration von 0,25pg/mikroliter. Um welchen Faktor müssen sie Ausgangslsg. verdünnen? Wie gehen sie praktisch vor..."
Danke und Gruß,
Charly | | acribio | 2009-10-05 14:14:38 |
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Beitrag #2 • | zu 1.) - ist korrekt
kleine Eselsbrücke:
wenn man 10% auf 1% bekommen möchte, dann muss man 1:10 verdünnen. Bei einem Zielvolumen von 45ml muss dass heissen, dass man 4,5ml der Stocklösung benötigt. Diese brauchen dann genau 40,5ml Wasser um auf 45 zu kommen.
zu 2.)
1 ng = 1'000 pg
200 ng = 200'000pg
200'000 pg/µl sollen also auf
0.25 pg/µl verdünnt werden
das ist (etwa! - dazu später) 1:10^6 oder 1:1000'000, also eine Verdünnung von Eins zu eine Million
Praktische Vorgehensweise:
Du nimmst einfach den Millionsten Teil eines Mikroliters der ursprünglichen DNA-Lösung und verdünnst diesen auf 1µl
;)
| | acribio | 2009-10-06 11:29:31 |
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Beitrag #3 • | Na Spass beiseite:
Es soll eine Verdünnung von 0.25pg/µl hergestellt werden, das hört sich auf den ersten Blick unglücklich an, da es keine runde Zehnerpotenz abwärts ist von 200ng/µl.
Wie soll das wohl praktisch gelöst werden.
0.25 ist 1/4tel von 1
d. h. wenn man eine Stocklösung von 1pg/µl herstellt (das ist wohl hier der Sinn der Frage) (oder 10pg/µl)
dann braucht man diese nur noch 1:4 verdünnen (oder 1:40)
und hat die Endkonzentration erreicht.
Wie verdünnt man jetzt 200000pg/µl so, dass es halbwegs genau ist?
zuerst 1:100 also 10 µl auf 1000 auffüllen. 10µl sind das Minimum, was man nehmen sollte, darunter ist die Pipettier-Ungenauigkeit zu groß. Ebenso ist 1000µl das Höchste der Gefühle (max 2000µl).
Die Konzentration ist dann 2000ng/µl. Diese würd ich noch mal 1:100 verdünnen => 20ng/µl (Lsg. A)
Diese Lösung würde ich jetzt 1:20 auf 1ng/µl verdünnen also z. B. 50µl auf 1000µl auffüllen und als Stocklösung für die PCR einfrieren.
Dann kann man z. B. eine 10µl PCR mit 2µl dieser Lösung versetzen =>0.25pg/µl
Oder, wenn als Stocklösung gefordert würde ich die Lsg. A 1:80 verdünnen.
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