Enzyme |
| Viviane | 2012-01-31 15:20:08 |
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Beitrag #1 • | Hallo zusammen!
Bei meiner Klausurvorbereitung komme ich bei zwei Aufgaben nicht weiter. Ich würde mich sehr freuen, könnte mir da jemand nen Denkanstoß geben...
1) Sie untersuchen das kinetische Verhalten des Enzyms Pyrophosphatase aus E. coli. Das Enzym besitzt dort eine Masse von 120 kD und besteht aus sechs identischen Untereinheiten. Als Aktivitätseinheit ist dabei die Enzymmenge definiert, die unter Standardbedingungen bei 37°C in 15 Minuten 10 micromol Pyrophosphat hydrolysiert. Das gereinigte Enzym hat einen Vmax-Wert von 2800 Einheiten pro Milligramm Enzym.
a) Wie viel Mole Substrat werden pro Sekunde von einem Milligramm Enzym hydrolysiert, wenn die Substratkonzentration viel größer als KM ist?
b) Wie viel Mol aktives Zentrum besitzt 1 mg Enzym? (Jede UE soll ein aktives Zentrum haben.)
c) Welche Wechselzahl hat das Enzym?
Die Antworten zu der Aufgabe liegen mir vor, allerdings komm ich nur zu Teilen, eher durch Raten bzw. Einsetzen auf die Rechenwege.
Was muss ich also wann rechnen?
a) 31,1micromol
b) 0, 05 micromol
c) 622s^-1
Die andere Aufgabe sieht so aus:
Folgende Ergebnisse aus Molekulargewichtsbestimmungen eines unbekannten Enzyms E liegen vor:
- MALDI-TOF: MW = 210 000 D
- Gelfiltration: MW = 240 000 D
- SDS-PAGE: MW = 70 000 D
Wie sieht E aus und welche molekulare Masse besitzt es?
Meine Idee dazu:
MALDI- TOF ist soweit ich recherchiert habe die genaueste Methode zur Massenbestimmung auf eine Dalton genau, also läge die Schwankung da bei 209999 bis 210001.
Es folgt die SDS- Page, wobei hier das Protein denauriert wird bevor es zur Messung kommt. Hier liegt die Schwankung unter 10kDa, was Werte einschließt zwischen 60 und 80 kDa. Oder?
Bei der Gelfiltration treten am ehersten Abweichungen zur wahren Masse auf, da hier das nicht entfaltete Enzym mit der porösen Säulenoberfläche wechselwirken kann.
Bei MALDI und Gelfiltration wird das Enzym nicht denaturiert.
Stimmt das so? Wie kommt dieser große Messunterschied zwischen MALDI- TOF und SDS- Page zu Stande. Wird in der SDS vllt weiter als nur bis zur endgültigen Entfaltung getrennt? In drei gleichgroße Untereinheit das Enzyms vllt?
Bitte helft mir!
biochemisch verworrene Grüße
| | acribio | 2012-01-31 17:33:53 |
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Beitrag #2 • | Hallo Viviane,
schon mal eine kleine Hilfe:
>In drei gleichgroße Untereinheit das Enzyms vielleicht?
ja
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