Probenpuffer Western Blot |
| alibaba669 | 2010-04-13 09:58:30 |
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Beitrag #1 • | Ich habe eine Frage zum Probenpuffer (nach Laemmli) im Western Blot, und zwar stellt sich mir die Frage, warum genau ich dem Puffer TRIS zugebe. TRIS hat doch eine Pufferfunktion, allerdings bei pH 7,2 bis 8,0. Der Probenpuffer hat jedoch einen pH von 6,8, wodurch doch eigentlich die Pufferfunktion nicht mehr gegeben ist, oder seh ich das falsch? Kann mir da jemand eine Antwort zu geben?
Gruß,
alibaba669 | | acribio | 2010-04-13 21:47:16 |
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Beitrag #2 • | Hallo,
herzlich willkommen im Forum!
TRIS ist ein hervoragendes Puffermolekül für Proteine und in Western Blot Proben sind Proteine enthalten. Deshalb ist Tris im Probenpuffer.
>wodurch doch eigentlich die Pufferfunktion nicht mehr gegeben ist, oder seh ich das falsch?
Ja das siehst du falsch.
1.) der ph 7,2 und ph 6,8 sind sehr nahe beieinander. Der Konzentrationsunterschied der Protonen verhält sich wie 10^-7.2 zu 10^-6.8
2.) Puffern heisst, dass die Zugabe von Säure/Lauge den pH-Wert relativ wenig ändert. Hierfür gibt es einen optimalen Bereich, der bei Tris bei pH 7.2-8.0 ist. Außerhalb dieses Bereichs nimmt die Pufferwirkung nicht sooo schlagartig ab. D.h. ausserhalb dieses Bereichs (z. B. unterhalb, also ph6.0) sind die pH-Änderungen bei Zugabe von Säure leicht größer, als im Pufferbereich. Erst wenn man deutlich ausserhalb des Pufferbereichs ist, ist keine Pufferwirkung mehr gegeben.
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