Phenol/Chloroform zur Fällung von DNA - Phenol rot bis violett |
| Nicki | 2009-06-16 17:52:35 |
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Beitrag #1 • | Hi.
ich wollte mir gerade Phenol/Chloroform ansetzten um DNA zu fällen. Habe bemerkt, dass das Phenol lila ist, was es vor einiger zeit definitiv nicht war :(. Kann man das noch ohne Probleme verwenden? | | acribio | 2009-06-16 23:12:01 |
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Beitrag #2 • | Hallo Nicki,
na auf gar keinen Fall!
Hast du festes Phenol genommen, das vielleicht schon rot bis violett war? Bitte gleich in den halogenierten Abfallbehälter!
Also es gibt zwei Methoden im molekularbiologischen Labor mit Phenol-Einsatz. Die eine ist für RNA-Isolierung, mit Guanidiniumisothiocyanat und die andere ist wohl die, die du machen möchtest. Dabei stellt man eine Mischung aus Phenol und Chloroform her und diese muss aber noch mit einem wässrigen Puffer
überschichtet werden, zum Einen zur Stabilisierung, damit das Phenol nicht rot anläuft. Und zum Anderen zur pH-Stabilisierung.
Beide Phenol-Lösungen sind recht kritisch! Auf GAR KEINEN FALL darf auch nur die Spur einer Färbung in deiner Lösung sein. Kaufe dir
lieber diese Lösung noch mal frisch, es gibt sie im Handel schon mit dem nötigen Puffer überschichtet (glaube ich).
Im Übrigen würde ich mit Phenol seehr vorsichtig sein. Zum Einen aus gesundheitlichen Gründen, zum Anderen hatte ich immer sehr schlechte Erfahrungen mit deiner Methode. Nur für gute RNA würde ich noch zu phenolhaltigen Lösungen greifen. Und hierbei sollte man die Lösung ebenfalls kaufen und nicht herstellen.
Die roten Produkte im Phenol sind Oxidationsprodukte des Luftsauerstoffs. Dabei entstehen saure Produkte, die dann im wässrigen Puffer löslicher sind als das hydrophobe Phenol (deshalb die Überschichtung zur Stabilisierung).
| | Nicki | 2009-06-17 13:13:20 |
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Beitrag #3 • | Hi.
Vielen Dank für die schnelle Antwort. Ja ich wollte eine Phenol/Chloroform-Extraktion machen. Das Phenol ist flüssig. Habe jetzt ein Kit verwendet, vielleicht ist da die Ausbeute auch gleich noch höher ;)... | | Beiträge 1 bis 3 von 3 angezeigt. |
