cDNA |
| Nadja | 2010-05-04 14:23:53 |
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Beitrag #1 • | Hi,
ich habe einen Vektor mit einem speziellen cDNA Insert amplifiziert und soll nun mittels Verdau testen, ob ich das richtige amplifiziert habe. Nun meine Frage, ich habe keine Sequenzen bekommen, die ich auf spezielle Schnittstellen untersuchen kann, die Sequenz des Vektors kann ich ja im Internet finden, aber die Sequenz der cDNA? Gibt es nicht zu jeder DNA mehrere cDNA-Klone, so, dass ich schon wiossen muss, welcher Klon für die Klonierung verwendet wurde? Und ich muss doch auch wissen, mit welchem Enzym das Insert ursprünglich in den Vektor kloniert wurde oder nicht? Dann noch eine andere Frage, wenn ich Sequenzen im Internet finde, ist die mRNA-Sequenz immer länger als die der cDNA, ich dachte die wären immer komplementär? Entschuldigt bitte, wenn meine Fragen etwas komisch sind, aber ich bin ganz neu auf dem Gebiet der Molekularbiologie... | | acribio | 2010-05-04 18:45:26 |
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Beitrag #2 • | Hallo Nadja,
Willkommen im Forum.
| mittels Verdau testen, ob ich das richtige amplifiziert habe |
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vermutlich ist die Antwort auf Deine Fragen ganz einfach:
Du sollst mit einem Enzym aus der Multiple Cloning Site (MCS) das Insert herausschneiden (je nach Vektor z. B. mit EcoRI oder BamHI oder anderen meist gängigen Restriktionsenzymen). Natürlich sollest du mit diesem Enzym das Insert auch heraustrennen können, ein Doppelverdau wäre natürlich schwieriger. Vielleicht einfach mal fragen, welches Enzym Du verwenden sollst, bzw. mit welchem Enzym das Insert hineinkloniert ist.
Wenn du dann diesen Verdau auf einem Agarose-Gel elektrophoretisch auftrennst, dann reicht vermutlich eine Überprüfung der Größe es Inserts aus!!
Nichts anderes ist vermutlich gemeint.
Einziges Problem könnte ein weiteres Vorkommen der Schnittstelle im Insert sein. Dabei entstehen jedoch weitere Fragmente, die in der Größe dann charakteristisch sind (und im Arbeitskreis vermutlich bekannt).
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